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O curso terá como base o estudo da expressão gênica utilizando um fator de

transcrição. Os alunos trabalharão com processos básicos de biologia molecular (cultura de

bactérias e manipulação de DNA), na construção de um vetor plasmidial contendo o gene

do fator de transcrição a ser estudado. Além disso, serão avaliadas a funcionalidade da

construção e a atividade do fator com diversas técnicas de biologia celular: transfecção do

vetor plasmidial em células eucarióticas; análise de expressão do gene clonado por

citometria de fluxo e western blot; ativação e translocação nuclear do fator de transcrição

por microscopia de fluorescência e análise da ativação transcricional do fator por ensaio de

gene repórter (luciferase). Aulas teóricas serão ministradas para explicar os métodos

utilizados e discutir as estratégias de abordagem usadas atualmente no estudo da expressão

gênica.

Pesquisador responsável: Dr. João Viola

Pós-graduandos: André Cruz, Douglas Faget e Giuliana Mognol

O curso visa o aprendizado de metodologias utilizadas para a detecção de alterações

genéticas relacionadas ao surgimento dos principais tipos de câncer hereditário. As

abordagens utilizadas serão: extração de DNA de sangue periférico e de amostras tumorais;

reação em cadeia da polimerase (PCR); eletroforese em gel de agarose; seqüenciamento de

alinhamento de seqüências através do programa BLAST; e FISH (fluorescent in situhybridization

tumorais.

Pesquisador responsável: Dr. Héctor Seuanéz

Pós-graduandos: Adriana Reis, Fernanda Aguiar e Raquel da Hora

Os mecanismos epigenéticos de regulação gênica têm sido estudados

extensivamente nos últimos tempos, principalmente em tumores. Isso porque esses

mecanismos podem levar à repressão de genes importantes, como os genes supressores de

tumor e à ativação de oncogenes. Além disso, por serem reversíveis, as alterações

epigenéticas têm sido apontadas como possível alvo para terapias anti-tumorais. O câncer

de esôfago é um dos 10 tipos de tumor mais freqüentes e letais no Brasil e no mundo,

porém existem poucos estudos sobre os mecanismos epigenéticos envolvidos no

desenvolvimento desta neoplasia. Dentro deste contexto, nosso grupo vem estudando as

alterações epigenéticas encontradas no carcinoma epidermóide de esôfago. O curso visa

apresentar aos alunos metodologias que permitam avaliar os mecanismos epigenéticos

envolvidos na regulação dos genes que participam do ciclo celular. As abordagens

utilizadas serão: avaliação da expressão do mRNA por PCR quatitativo dos genes p14ARF e

de DNA plasmidial e seqüenciamento de DNA.

Pesquisador responsável: Dr. Luis Felipe Ribeiro

Pós-graduandos: Sheila Coelho e Tatiana Simão

Esse curso tem como objetivo principal apresentar uma visão integrada do campo de

estudo das neoplasias hematológicas e suas principais abordagens experimentais. Serão

discutidos conceitos sobre a hematopoiese normal e transformação maligna; neoplasias

hematológicas mielóides e linfóides: marcadores celulares e moleculares; alterações

genéticas nas leucemias (mutações, translocações, alterações do número de cópias, fatores

epigenéticos, haploinsuficiência); fundamentos do tratamento e monitorização molecular

das leucemias. Serão estudados a leucemia mielóide crônica e os linfomas B como modelos

experimentais, com abordagens metodológicas que incluirão: extração e avaliação de

ácidos nucléicos (RNA e DNA); estudo dos rearranjos de genes de imunoglobulina e

receptor de células T como marcadores de clonalidade; estudo de translocações e mutações

por reação em cadeia da polimerase (PCR) e seqüenciamento; quantificação da carga

Tempo Real; citometria de fluxo; técnicas de imunolocalização celular de proteínas e RNA:

Pesquisador responsável: Dra. Rocio Hassan

Pós-graduandos: Vanesa Scholl, Marta Nogueira, Mario Barros e Carolina Minnicelli

Esse curso tem como objetivo introduzir o aluno aos princípios da terapia gênica.

As aulas teóricas irão abordar aspectos relevantes do histórico e da biologia básica da

terapia gênica, assim como uma visão geral das aplicações práticas e clínicas desta

metodologia. Nas aulas práticas, será enfatizado todo o processo de produção dos vetores

retrovirais e lentivirais, as diferenças entre estes dois tipos de vírus e o processo de

pseudotipagem dos vetores. Também serão avaliadas as diversas modalidades desta

metodologia como a expressão de transgene, silenciamento gênico e o sistema indutível de

expressão gênica. Para finalizar, serão realizados ensaios celulares demonstrando algumas

aplicações práticas desta metodologia.

Pesquisador responsável: Dr. Martin Bonamino

Pós-graduandos: Ana Carolina Leal e Leonardo Chicaybam

Esse curso visa o aprendizado das principais metodologias utilizadas na avaliação

da morte celular por apoptose, vias de sinalização relacionadas e a regulação do processo

após indução de morte com quimioterápicos em linhagens tumorais. Linhagens celulares

tumorais com diferentes características serão tratadas com quimioterápicos e o processo de

morte celular induzido será caracterizado. Diversos aspectos da apoptose serão avaliados

por citometria de fluxo. Será avaliada por western blot a ativação de caspases através da

clivagem de substratos, bem como a morfologia nuclear das células apoptóticas por

microscopia de fluorescência e a fragmentação internucleossomal de DNA em gel de

agarose. A regulação do processo será estudada por PCR em tempo real de genes

envolvidos no processo de morte celular. Cada abordagem será explicada e comparada com

outras técnicas disponíveis.

Pesquisador responsável: Dra. Cinthya Sternberg

Pós-graduandos: Érika Carvalho, João Laclette e Mauricio Caetano

O curso tem como objetivo estudar os aspectos celulares e moleculares envolvidos

com o fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR) nas neoplasias. Nas aulas práticas,

os alunos farão cultura de linhagens leucêmicas e utilizarão amostras sanguíneas de

indivíduos saudáveis, separadas por gradiente de densidade. A detecção da expressão e

funcionalidade das proteínas MDR será analisada por citometria de fluxo e o envolvimento

dessas proteínas com a resistência será avaliado através do ensaio de citotoxicidade MTT.

A fim de verificar a expressão de proteínas relacionadas à resistência à apoptose, serão

realizados imunocitoquímica e Western blot, no qual os alunos farão extração de proteínas

e dosagem pelo Método Lowry.

Pesquisador responsável: Dra. Raquel Maia

Pós-graduandos: Ana Carolina Ferreira, Gabriela Nestal e Paloma Souza

O curso visa o aprendizado de metodologias utilizadas na identificação e validação

de biomarcadores envolvidos no diagnóstico e tratamento oncológico. Com esse objetivo, o

curso apresentará uma visão geral sobre os biomarcadores, enfatizando seu conceito e

importância no diagnóstico e tratamento do câncer, bem como a importância dos cuidados

com a coleta, preparo e conservação das amostras. O curso contará com uma parte teórica

inicial sobre técnicas utilizadas no rastreamento de biomarcadores, onde serão discutidas

alterações genéticas como biomarcadores, com foco na análise de instabilidade de

microsatélite, aulas práticas sobre validação dos biomarcadores, com foco no PCR em

tempo real e na imuno-histoquímica, como uma técnica utilizada no diagnóstico clínico. O

curso contará ainda com uma aula teórica final onde será apresentada uma visão geral sobre

os biomarcadores já estabelecidos e que se traduzem na prática clínica.

Pesquisador responsável: Dr. Carlos Gil

Pós-graduandos: Danielle Braggio, Luciene Schluckebier e Marcus Valadão